蒙药砂蓝刺头定性与定量品质操作措施钻研（三）

2.4.4 线性关连审核

用70%甲醇对于蕴藏液妨碍逐级稀释，蒙药患上到2.02四、砂蓝20.240、刺头操作措施50.600、定性定量101.200、品质151.800μg/m L的钻研系列比力品溶液，分说详尽罗致溶液各10μL，蒙药注入色谱仪妨碍测定，砂蓝以比力品的刺头操作措施进样品质浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），定性定量妨碍线性回归，品质患上尺度曲线方程为Y=35.919 X-4.386 4,钻研r=1.000 0，服从表明，蒙药MMQ在2.024～151.800μg/m L线性关连精采。砂蓝

2.4.5 定量限以及检测限

取比力品蕴藏溶液，刺头操作措施逐渐稀释，按“2.4.1”项下色谱条件进样，进样量为10μL，信噪比（S/N）为10∶1，测患上MMQ的定量限约为2.024μg/m L。信噪比（S/N）为3∶1时，MMQ的检测限约为0.607μg/m L。

2.4.6 详尽度试验

选取高、中、低（101.200、50.600、20.240μg/m L)3个品质浓度的比力品溶液，按“2.4.1”项下色谱条件下同1 d内不断进样6次，测患上MMQ峰面积的RSD分说为0.73%、0.95%、1.37%。不断测定3 d，天天进样1次，记实MMQ峰面积，测患上MMQ峰面积的RSD分说为2.06%、1.61%、1.88%。服从展现日内、白昼详尽度均小于3%。表明日内、白昼详尽度精采，仪器晃动。

2.4.7 一再性试验

取样品粉末0.25 g(S5），按“2.4.2”项下措施制备供试品溶液，平行6份，按“2.4.1”项下色谱条件进样，进样量为10μL，记实MMQ的峰面积。接管外标一点法合计MMQ的含量，样品中MMQ的品质分数为5.28 mg/g,RSD为1.37%，表明此措施一再性好。

2.4.8 晃动性试验

取样品粉末0.25 g(S5），按“2.4.2”项下措施制备供试品溶液，按“2.4.1”项下色谱条件分说于0、一、二、四、八、十二、24 h进样，进样量为10μL，服从展现MMQ峰面积的RSD为1.81%，表明供试品溶液在24 h内晃动。

2.4.9 加样接管率试验

详尽称取已经知含量的EGT粉末0.125 g(S5）详尽称定，按已经测定的50%、100%、150%详尽退出比力品溶液，按“2.4.2”项下措施制备供试品溶液，按“2.4.1”项下色谱条件进样，记实峰面积，接管外标一点法合计加样接管率。服从MMQ的平均加样接管率为101.5%,RSD为1.46%。

2.4.1 0 定量测定

取7批EGT样品，按“2.4.2”项下措施制备供试品溶液，按“2.4.1”项下色谱条件进样，经HPLC测定后，服从展现7批EGT(S八、S9因收集光阴较久，未测定）的品质分数规模在0.13%～0.53%，见表1。

3 品评辩说

3.1 目的成份的抉择

EGT为蒙古族习用药材，当初无相关的质控尺度以及专属性成份的钻研，本钻研经由MCI色谱、硅胶色谱、高效液相色谱中分说本领，患上到专属性成份，经核磁判断为一种喹啉酮类生物碱（MMQ）。本试验将EGT与此外4种近源样品：大蓝刺头、硬叶蓝刺头、全缘蓝刺头以及蓝刺头，妨碍薄层色谱以及HPLC检测比力，服从展现大蓝刺头、硬叶蓝刺头、全缘蓝刺头不含有MMQ，在蓝刺头样品中虽含有大批MMQ，但远低于其检测线。因此MMQ作为砂蓝刺头中含量较高且专属性较强的成份，建树以其为目的成份定性定量措施，有确定的迷信性与适用性，可能更好地评估EGT药材的品质。

3.2 薄层色谱分说

在薄层分说睁开剂的审核中，发现酸对于薄层睁开系统的影响较大，非酸系统下，黑点较少、分说度较差。筛选了多种显色剂，搜罗磷钼酸、碘化铋钾、碘、10%硫酸乙醇等，显色下场均欠安，不显色概况显色不锐敏，最终定为以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（6∶1∶1∶0.8）为睁开剂，254 nm紫外灯下检视荧光黑点即可。比力了差距厂家的薄层板：银龙-HSGF254板、黄海-HSGF254板、德国MNSGF板以及德国MNHSGF板，所建树的薄层措施在上述多少种板中均能取患上很好的睁开下场，其中以德国MNHSGF板分说下场最佳。

3.3 指纹图谱建树

中药色谱指纹图谱可能较为周全地反映中药的部份品质。本试验建树指纹图谱合成措施能很好地将EGT与同属其余植物相差距。相似度合成评估中，S9（批号20120815）相似度仅为0.679，其余EGT样品相似度均高于0.9，这揭示EGT样品陈置过久可能会影响其药材品质。这一发现为药材市场中EGT药材年限操作提供数据参考。差距源头的9批样品指纹图谱中的共有峰在数目以及相对于保存光阴上坚持不同，但各共有峰相对于峰面积有确定的差距，剖析各批次药材之间的品质存在差距，预料可能与药材产地、生终年限、采收期等因素无关。将EGT以及其余种蓝刺头的指纹数据妨碍统计合成，主成份合成以及聚类合乐成果不同，均能实现EGT与同属其余植物（蓝刺头、全缘叶蓝刺、硬叶蓝刺头以及大蓝刺头）的差距。在PCA中，16批样品聚为2大类，S1～S9号样品为差距批次EGT,S10～16号样品为蓝刺头属其余种样品，其中S8以及S9号样品为2012年群集的样品，虽经部署多年，成份有所着落，但仍归为EGT中。在聚类合成中，S8以及S9号样品处于统一组中；S14以及S15号样品为全缘蓝刺头也在统一组中，该服从与OPLS-DA服从不同。

3.4 含量测定

在建树MMQ的定量合成措施试验中，妨碍了提取措施（超声、加热回流）、提取溶剂（纯甲醇、70%甲醇、50%甲醇）、提取光阴以及提取次数的审核。最终判断的提牟利便操作重大、省时，对于砂蓝刺头中MMQ提取率高。审核了乙腈-水、乙腈-醋酸铵缓冲盐水溶液、甲醇-0.1%甲酸水溶液、乙腈-0.1%甲酸水溶液等行动相系统对于液相色谱分说下场的影响。最终判断的含测措施一再性好，MMQ的分说度以及含量测定RSD均适宜检测要求。此外，由于S8以及S9药材收集光阴过久，为了防止影响含量限度拟订的精确性，未对于这2批药材妨碍含量测定。

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(责任编辑：时尚)